生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗。科学家发现，在微生物m产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油(如下图)。
(1)用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用________、________方法从油料作物中提取。
(2)筛选产脂肪酶的微生物m时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供________，培养基灭菌采用的最适方法是________法。
(3)测定培养液中微生物数量，可选用________法直接计数；从微生物m分离提取的脂肪酶通常需要检测________，以确定其应用价值，为降低生物柴油生产成本，可利用________技术使脂肪酶能够重复使用。
(4)若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热dna聚合酶催化的________技术。
答案 (1)压榨；萃取。(注：两空顺序无先后)
(2)碳源；高压蒸汽灭菌。
(3)显微镜直接计数；酶活性(或：酶活力)；固定化酶(或：固定化细胞)。
(4)pcr(或：多聚酶链式反应，聚合酶链式反应)
解析 本题考查了植物油的提取、微生物的培养与应用及基因的克隆技术。对于不易挥发的植物油，一般采用压榨法或萃取法；植物油由c、h、o三种元素构成，微生物通常以此作为碳源，培养基常规的灭菌方法是高压蒸汽灭菌；测定微生物生长的方法很多，常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法，其中计数法常用计数器测定法，可利用显微镜进行观察计数；固定化酶是用物理的或化学的方法使酶与水不溶性大分子载体结合或把酶包埋在水不溶性凝胶或半透膜的微囊体中制成的，酶固定化后一般稳定性增加，易从反应系统中分离，且易于控制，能反复多次使用，便于运输和贮存，有利于自动化生产；基因的扩增通常采用pcr技术。
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